神经退行性变的概述

神经退行性疾病, 比如阿尔茨海默氏症(AD)或帕金森氏症(PD), 慢性和衰弱性疾病是否逐渐引起神经元细胞变性和/或死亡. 这些情况通常发生在老年人中,症状包括记忆丧失, 问题与运动, 行为变化和日常任务的困难. 

许多神经退行性疾病的特征是大脑中蛋白质的异常形成和聚集, 然而,确定复杂的病理机制涉及疾病的发病和其进展是具有挑战性的. 改进的体外模型,再现疾病的慢性性质, 结合先进的细胞模型,如原代细胞或诱导多能干细胞, 能增加十大靠谱网赌平台对疾病病理学的了解吗, 其作用机制和药物发现的贡献.


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关键优势

研究肽和药物诱导的作用

使用非干扰试剂研究疾病相关的神经毒性模型,以深入了解形态学变化

图1. 聚集tau肽对神经突起长度影响的慢性体外模型. 大鼠初级皮质神经元(r皮质, 接种于PDL涂层的96孔板,接种时间为20,000个细胞/孔,放置在Incucyte中® 在研究期间. 8天种子期后, 用溶解的或聚集的Tau蛋白(肝素4:1的比例)处理细胞, 37°C,零星旋转5d). 对神经突生长进行自动分割和定量. 聚集的Tau蛋白产生了浓度依赖性的神经突长度下降(80±5 vs. 166 ± 3 %, 在150µg/mL时,non - aggregation对神经突起的形成有明显的抑制作用.

获得动态的见解

神经突长度和细胞健康的多重动力学读数,以便更深入的了解

图2. 在帕金森病动力学模型中,氧化多巴胺(6-OHDA)治疗增加细胞死亡,减少神经突生长. 将大鼠初级纹状体和星形胶质细胞接种于PDL包被的96孔板(20,000年,15,000细胞/好, 分别感染Incucyte® Neurolight-Orange(十大靠谱网赌平台). 感染后10天用6-OHDA(2 - 500µM)处理,培养液中含有凋亡标志物Incucyte® Annexin V Green (0.5%; Sartorius). 荧光图像使用Incucyte实时捕捉® live-cell分析系统. 比较6-OHDA治疗的代表性图像(19, 56, 治疗后21 d 167 μ M)至对照组. 时间-过程和药物-反应曲线显示,神经突起长度随浓度而减少(橙色),同时Annexin V信号相应增加(绿色)。, 表明药物的有害作用的. 数据表示为Mean±SEM(3次重复).

图3. 帕金森病模型的脑区域特异性:与皮层区域相比,6-羟多巴胺选择性影响黑质和纹状体突起的生长. 大鼠初级纹状体的共培养, 黑色或皮质神经元和星形胶质细胞接种于pdl包被的96孔板(20,神经元和15,000星形细胞/, 分别感染Incucyte® Neurolight-Orange(十大靠谱网赌平台). 感染后10天使用6-OHDA(56 - 500µM)进行培养. 荧光图像使用Incucyte实时捕捉® live-cell分析系统. 条形图和药物反应曲线显示了药物对不同大脑区域的神经突长度(橙色)的选择性轮廓效应. 车辆数据显示神经突形成的不同大脑区域的发展. 数据表示为Mean±SEM(3次重复).

评估慢性疾病模型的活动性

了解相关神经退行性疾病模型中的神经元活动,以评估神经元网络的健康

图4. 功能评估显示Tau蛋白在保持连接的同时会导致神经元活动的丧失. 大鼠皮质神经元和星形胶质细胞(Neuroprime®, 作为共培养物(25,000年,15,000细胞/好, PDL涂层96孔板. 用基因编码的钙指示物Incucyte感染神经元® Neuroburst-Orange (Sartorius)监测随时间推移的自发神经元活动,通过测量钙的波动. 在Incucyte每24小时拍摄一次图像® 系统(3分钟扫描,每秒3帧). 一旦成熟, 功能网络形成(14天), 用ad相关肽tau(聚集的, 300 μg/mL)或蛋白磷酸酶抑制剂OKA (50 nM). 图像显示活动范围(最大/最小荧光)在一个完整的扫描. 钙迹表示视野内所有活动物体的钙波动. 条形图提供了活动对象数量(1/图像)和相关性(连通性)的量化。. 数据显示, 相对于汽车, Tau蛋白治疗减少了活动淋巴结的数量(1407±94个物体/图像vs. 920±43个物体/图像)及其平均强度(13.7 ± 1.7调焦和. 7.2 ± 3.6 OCU),而不影响相关性(0.95 ± 0.01 vs. 0.97 ± 0.1、2复制). 相反,OKA降低了活动节点的数量(180±24个物体/图像),平均强度(3.8 ± 0.3 OCU)以及相关性(0.27 ± 0.02, 6个重复). 数据以Mean±SEM表示.

利用相关的基于细胞的模型

使用您选择的体外神经变性细胞模型-与ips衍生细胞或原代细胞兼容, 在单一或共同培养中.

图5. 患者来源的AD iPSC模型在2D和3D显示不同的神经突发育和球体形成. 健康和AD (PSEN1突变)来源的iPSC神经元(Axol Bioscience)在25岁时接种于ReadySet + SureBond涂层的96孔板,000细胞/孔(2D)或ULA 96孔板在50,000细胞/好 and centrifuged (250 g; 10 mins). 球状体形成3天(3D), 根据供应商的方案诱导神经元分化(补充A+B). 2D研究:利用Incucyte自动定量神经突的发育® 软件分析模块(Sartorius)长达15天. 时间进程表明,患者来源的AD诱导多能干细胞系产生的神经突长度低于健康对照组(48±3 mm/mm2 vs. 分别为80±3 mm/mm2, 3次重复). 三维球体生长:在不受干扰的情况下,使用亮场分析对大小差异进行量化,时间长达15天. 基底膜基质® (2.25 mg/mL)添加到选定的孔中,第6天, 再观察9天,观察到球体的形态和过程发展. 时间进程显示两个细胞系的明显球形大小. 图片还显示了健康和阿尔茨海默氏症谱系的不同发育能力.

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Incucyte® NeuroTrack软件模块

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Incucyte® NeuroLight橙色慢病毒

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