用Incucyte和iQue分析定量动态t细胞功能

t细胞在适应性免疫中至关重要, 具有独特的表面受体,允许T细胞感知并对不同类型的病原生物做出反应,以及防御不需要的靶细胞, 比如新生的肿瘤细胞. t细胞的激活和增殖是调节免疫反应的作用和程度的基础, 需要动态模型来了解t细胞在对抗感染或疾病中的生物学特性.

的Incucyte® 活细胞分析系统和iQue先进的流式细胞仪平台可用于评估和定量T细胞的关键功能, 包括激活和集群, 抗体内化化验, chemotaxis, 细胞因子的生产, 以及复杂共培养模型的评价, 免疫细胞杀伤和内皮细胞迁移实验.

请求更多的信息

了解更多免疫学知识

icon-webcast

按需Webinar |优化高效细胞低温保存

低温保存是一个具有挑战性的,但必要的过程,在准备细胞为基础的治疗. 学习如何掌握低温保存.

Watch Now
t细胞的应用程序

使用相位对比成像和活细胞ICC (anti-CD71 Fabfluor-488)对PBMC激活的可视化. 用抗cd3和IL-2处理PBMCs (30K/孔), 或车辆控制, 并用anti-CD71-Fabfluor-488标记. a) Label-free phase-contrast imaging detects morphological differences between non-activated and activated PBMCs; phase-contrast imaging coupled with live-cell ICC shows upregulated CD71+ in activated cells. b)激活诱导细胞增大, 在较大的细胞亚群和较小的细胞亚群中增加细胞偏心和CD71+上调.

使用iQue高级流式细胞仪平台和ForeCyt软件进行T细胞活化评估. 不同处理对活化T细胞百分比和分泌IFNγ水平的剂量和时间反应. T细胞活化标志物的独特模式,观察到每个化合物的测试.

使用Incucyte免疫细胞杀伤试验观察免疫细胞/肿瘤细胞的相互作用. (1)小细胞毒性T细胞与大标记肿瘤细胞之间的物理接触(红色). T淋巴细胞分裂. (2)肿瘤细胞受到细胞毒性T淋巴细胞的攻击:“死亡之吻”. (3)肿瘤细胞胞浆肉芽化后立即进行caspase 3/7标记(绿色), 核凝结和细胞死亡. (4)肿瘤细胞有丝分裂:一个细胞变成两个细胞.

实时测量肿瘤细胞死亡和增殖(可选)使用Incucyte免疫细胞杀伤试验. 用户友好的Incucyte® 软件可以直接基于图像检测凋亡的肿瘤细胞(绿色物体), 用黄色标出)和实时计数活肿瘤细胞(Incucyte® 红色标记的原子核,用蓝色标注). 动力学读数揭示了处理效果的时间依赖性.

时间靶细胞和细胞因子分析. PMBCS去除SKOV-3 NucLight Green细胞,CD3/CD28 Dynabeads激活细胞. (a)用Incucyte分析靶细胞计数的时间进程. 使用TCA试剂盒的Qbead成分(Qbeads或分析构建器: IFNγ)对(B) IFNγ和(C) TNFα的时间细胞因子数据进行定量,这些数据只需要每天10 μ l的上清样品, 选项1和TNFα选项2)/ (D)靶细胞计数(Incucyte)和细胞因子(iQue3)随时间变化的AUC浓度响应曲线.

CD3xCD19 BiTE抗体诱导细胞毒性和靶细胞聚集. 用PBMCs接种Ramos NucLight Green细胞,用BiTE抗体(anti-hCD3xCD19)或对照抗体(anti-hCD3xβGAL)激活。. 使用(A)对照或(B) BiTE抗体72小时的代表性图像. Incucyte® 时间过程数据(每3 h图像)跟踪目标细胞的数量(C)和聚类(E). 绿色综合强度指标的折叠变化, 用GCU x μm2 (GCU x μm2)来定量靶细胞. 与对照抗体相比,在BiTE抗体存在下靶细胞杀伤72 h浓度-响应曲线(D)和聚类曲线(F).

活化PBMCs对肿瘤球形增殖的影响. 将稳定表达核限制性RFP的A549肿瘤细胞接种于圆形底ULA 96孔板中,使其形成球状体3 d. Once formed, 在有或没有抗cd3和IL-2抗体混合物的情况下,球形细胞与新鲜分离的PBMCs共培养. Incucyte® HD相和荧光图像比较了外周血单核细胞在非活化状态下对球形细胞增殖的影响, 顶部面板)和状态(激活, 下图)的Anti-CD3和IL-2抗体. 注意,在活化的PBMCs存在的情况下,球体的荧光强度明显下降. 时间进程图显示球形细胞毒性量化为荧光强度随时间的损失. 每隔6小时收集7天以上的数据. 每个数据点代表平均值±SEM, n=3孔.

白细胞外渗可见. 将CD3/CD28 Dynabead激活的原代T细胞接种在纤维连接蛋白培养的HUVEC单层上,使用Incucyte每分钟获取图像® System. 黄色和橙色箭头表示白细胞在HUVEC细胞之间移动,并最终沿着ClearView插入的孔(蓝色圆圈)向下移动.

原代T细胞向CXCL12外渗. 将CD3/CD28 Dynabead激活的原代t细胞接种在纤维连接蛋白培养的HUVEC单层上. 然后将含有T细胞:HUVEC单层共培养的插入物按指定浓度梯度暴露于CXCL12中. 使用Incucyte每30分钟采集一次图像® 进行了ZOOM和相分析. 在t=6小时时进行药理学反应分析. 每个数据点代表平均值±SEM, n=4.

References

Clustering
Zumwalde等,2013. October 1; 191(7): 3681–3693. doi:10.4049 / jimmunol.1201954.

免疫细胞死亡
McCormack等,2013. Apr; 62(4): 773–785. doi:10.1007/s00262-012-1384-4

Live-Cell分析产品

探索活细胞分析产品

请求报价、演示或更多信息

你还对哪些领域感兴趣? (选择所有适用的)

请求演示、文档或更多信息