实时活细胞分析测定中性粒细胞功能

中性粒细胞是感染部位的第一道防线, 在先天免疫系统中起重要作用, 通过摄入细菌和释放降解并杀死病原体的抗菌酶. 中性粒细胞的招募和功能是宿主防御的关键, 但会导致炎症 , 导致阿尔茨海默氏症和风湿性关节炎等疾病的发展. 

的Incucyte® 活细胞分析系统已被用于评估中性粒细胞对趋化因子的反应,使用趋化性分析, 以及通过体外NETosis评估细胞功能, 吞噬和分化实验.

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中性粒细胞的应用程序

量化趋化作用

测量相关的表面接触介导的细胞迁移. ClearView膜的低孔密度保证了细胞必须通过与生物相关的表面向趋化剂迁移. 中性粒细胞 seeded on an uncoated ClearView membrane were unable to migrate towards the chemoattractants IL-8 and fMLP (left); however, 基质涂膜上的细胞显示出明显的趋化特征(右). 这些数据表明,在该模型中,整合素和/或细胞表面受体与底物的相互作用在中性粒细胞趋化中发挥关键作用. 相反,使用康宁试剂进行中性粒细胞迁移研究不需要涂层® Transwell® 可消耗的(数据未显示),表明中性粒细胞在Transwell的活跃迁移® 在康宁没有过滤器® Transwell® 系统.

想象 & 量化NETosis

可视化和量化NETosis. 用DMSO将HL-60细胞分化为中性粒细胞型(1.25% v/v)和ATRA (0.1 μM). 用PMA刺激产生的多核dHL-60细胞. 刺激后约2小时,细胞核开始解致密. HD相和荧光图像显示中性粒细胞NETosis的特征形态, 由于细胞质与核质混在一起,在相位图像中不再可见细胞核. 核内容物移动到质膜上并释放出来.

动力学数据显示PMA诱导NETosis, Incucyte检测到® 细胞毒素绿色试剂与外部DNA结合.

量化吞噬作用

分化决定吞噬能力. 将HL-60细胞暴露于0.1个µM atRA, 1个.2% DMSO, 5天. 然后对细胞进行播种和Incucyte® pHrodo® 加入绿色生物文章.  评估分化HL-60细胞的吞噬能力. 数据显示naïve和分化的HL-60细胞有显著差异, 分化细胞产生的荧光面积大幅增加, 指示性的吞噬作用.

由初级中性粒细胞吞噬. 从外周血中提取初级中性粒细胞,然后播种和植入细胞® pHrodo® 加入绿色生物文章.  初级中性粒细胞具有高度吞噬功能, 吞噬生物制品导致荧光信号增加.

监控分化

跟踪分化. 相图显示未分化的HL-60细胞和分化为中性粒细胞样细胞的HL-60细胞在形态上存在差异.25% DMSO和1 μ M ATRA到RPMI + 10% FBS培养基. 动力学数据显示,HD相融合检测细胞增殖差异.

监视细胞形状的变化

嗜中性粒细胞形状(偏心)的变化. 全血pmn接种于含Incucyte FabFluor-488标记CD11b抗体和Opti-green背景抑制因子的基质中,CSCL8浓度增加, 在Incucyte活细胞分析系统中成像,并捕获相和绿色荧光图像. Incucyte cell -by- cell 分析 软件用于定量随时间变化的细胞形状和CD11b表达.

参考文献

参考文献

NETosis; Gupta et al 2017. J Immunol. 2017年12月1. pii: ji1700905. doi: 10.4049 / jimmunol.1700905. 

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