评估NK细胞功能和表型

评估NK细胞功能和表型

自然杀伤细胞(NK)作为人体对感染和癌症的第一反应者,负责免疫监测. 了解NK的生物学和活性对充分利用其免疫反应潜力至关重要. 使用Incucyte® 活细胞成像和分析以及iQue® 3先进的流式细胞术的活动,如免疫表型, 功能活动评估, 细胞生存能力, immunophenotyping, 以及细胞溶解效应蛋白的分析, 细胞因子, 和趋化因子.

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3D免疫细胞杀伤

用Incucyte测量肿瘤球状体的ADCC®. SKOV-3 Incucyte的混合相和荧光图像® 有免疫细胞存在的红色球体, 未处理或存在抗cd3 (10 ng/ml)和IL-2 (10 ng/ml)或赫赛汀(0.08 - 50ug /mL). 根据红色荧光强度对细胞毒性进行定量. 数据显示,激活的t细胞群和赫赛汀诱导的细胞毒性可以破坏肿瘤球体.

在生理学相关模型中获得NK细胞介导的肿瘤细胞杀伤的生物学见解


自然杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞毒性诱导浓度依赖性靶细胞死亡, granzyme生产.

编码Raji肿瘤细胞(20K/孔)与来自两个不同供体的PBMCs (200K/孔)共培养. 用三种抗cd20抗体Ab-1 (IgG1)中的一种孵育PBMCs。, Ab-2 (IgG1)或阴性对照Ab-3 (IgA2). 浓度范围为10ug/mL - 0.128毫微克/毫升.

4小时, 使用Human NK cell killing Kit和iQue对10个µL样品进行分析,评估肿瘤细胞杀伤能力® 3, Granzyme A也使用iQue进行测量® 人NK细胞伴侣试剂盒. (A,B)两个供体杀死的靶细胞对抗体的反应不同. (C,D)颗粒酶A的产生具有浓度依赖性和供体依赖性. (E,F) NK细胞上CD16的检测随着抗cd20抗体浓度的增加而降低.  这可能与CD16脱落或CD20抗体竞争有关.

细胞因子刺激增强NK细胞对肿瘤细胞的直接杀伤. 编码的K562肿瘤细胞(20K/well)与富集的(负选择的)人NK细胞共培养,在单独培养基(非激活NK细胞)或含有200 U/mL IL-2的培养基中培养16-18小时 & 100ng /mL IL-15(活化NK细胞),作用比为1:1或5:1.  在4 h和24 h分别对10份µL样品进行iQue分析,以评估对肿瘤细胞的杀伤作用® 人NK细胞杀伤试剂盒和iQue® 3. (A)与未激活或细胞因子激活的NK细胞共培养4小时后靶细胞活力的直方图. (B,C)肿瘤细胞与未激活或细胞因子激活的NK细胞共培养(B) 4小时或(C) 24小时后靶细胞死亡百分比的总结. 

同时定量NK细胞表面蛋白 & 细胞因子的表达


NK细胞的激活在靶细胞存在的情况下被诱导,并通过细胞因子的刺激进一步增强. 编码的K562肿瘤细胞(20K/well)与富集的(负选择的)人NK细胞共培养,在单独培养基(非激活NK细胞)或含有200 U/mL IL-2的培养基中培养16-18小时 & 100ng /mL IL-15(活化NK细胞),效靶比为5:1. 共培养24 h后,取出10份µL样品,iQue进行分析® 人NK细胞杀伤试剂盒和iQue® 3系统. (A)激活标志物CD69和CD25的表达. (B) IFNg和Granzyme B分泌的产生. (C)通过联合iQue同时评估其他细胞因子® iQue的人类NK细胞伴侣试剂盒® 人NK细胞杀伤试剂盒.  NK =自然杀伤细胞. T =靶向K562肿瘤细胞.

IL-2和IL-15的激活导致激活标志物的表达和多种效应蛋白的分泌增加, 例如Granzyme B和CCL5 (RANTES). 当NK细胞与靶细胞共同培养时,这些作用进一步增强.

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参考文献

进一步阅读:

1. Tarazona R等. NK细胞生物学及基于NK细胞的肿瘤免疫治疗研究进展. 癌症Immunol Immunother. 69年5月,2020 (5):879 - 899. doi: 10.1007/s00262-020-02532-9. Epub 2020年3月4日
2. 哈金斯JJ, Khan ST, Park MM, Auer RC, Ardolino M. 杀手2.0: NK细胞疗法处于癌症控制的前沿. 中国投资. 2019年9月3日,129 (9):3499 - 3510. doi: 10.1172 / JCI129338
3. 瓦格纳SN等人. 天然杀伤细胞在抗病毒免疫中的作用. 当今微生物学报. 2016年2月,16:15-23. doi: 10.1016/j.coviro.2015.10.008. 2015年11月16日
4. 姚铮,郑铮,吴一,郑俊华. 冠状病毒引起的肺炎患者的免疫环境调节, MERS-CoV和SARS-CoV-2. 老化(奥尔巴尼纽约). 2020年5月2日,12. doi: 10.18632 /老化.103101

代表Incucyte® 和技术® 出版物


NK在肿瘤细胞抑制和耐药性中的作用

Sarhan D,等. 适应性NK细胞抵抗由IL37驱动的调节性t细胞抑制. 癌症Immunol Res. 2018年7月,6 (7):766 - 775. doi: 10.1158/2326-6066.cir - 17 - 0498. Epub 2018年5月21日

王德良,王德良,王德良. 阻断抑制受体NKG2A的表达可以克服肿瘤对NK细胞的耐药性. 中国投资. 2019年3月12日,129 (5):2094 - 2106. doi: 10.1172 / JCI123955. 2019年5月1日

NK汽车

Li Y, Hermanson DL, Moriarity BS, Kaufman DS. 嵌合抗原受体修饰的人诱导多能干细胞天然杀伤细胞增强抗肿瘤活性. 细胞干细胞. 2018年8月2日,23 (2):181 - 192.e5. doi: 10.1016/j.阀杆.2018.06.002. Epub 2018 6月28日

高通量ADCC检测方法的开发

等. 利用高通量流式细胞仪进行ADCC检测,以获得法规遵从性. 生物技术nol代表(Amst). 2020年4月19日,26日:e00456. doi: 10.1016/j.btre.2020.e00456. eCollection 2020年6月

NK细胞与疫苗开发

刘志强,刘志强,刘志强,刘志强. mf59佐剂疫苗选择性诱导抗体效应功能反应. 中国投资. 2020年2月3日,130 (2):662 - 672. doi: 10.1172 / JCI129520

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