Macrophages

利用实时活细胞分析了解巨噬细胞功能

巨噬细胞在感染性疾病期间的免疫调节中发挥重要作用, cancer, 神经系统疾病, 和愈合, 对各种细胞信号做出反应,改变它们的反应. 存在于身体的每一个组织中, 巨噬细胞呈现出组织特异性的形态, 比如枯否细胞和小胶质细胞, 它们在哪里吞噬微生物和凋亡细胞, 在宿主防御中的核心作用.

的Incucyte® 活细胞分析系统已被用于询问巨噬细胞的功能, 评价形态学和表面标记物研究细胞分化, chemotaxis, 吞噬作用和efferocytosis, 可以更好地理解巨噬细胞在健康和疾病中的功能.

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监控分化

确认分化. 监测THP-1永生化细胞和血源性初级单核细胞分化过程中的形态学变化.  THP-1细胞经5 ng/mL PMA处理48小时后分化为M0巨噬细胞. 原代单核细胞分化为m1样表型, 50 ng/mL GM-CSF孵育6天,1 ng/mL LPS + 20 ng/mL IFN-γ再孵育1天, 或者变成M2型, 50 ng/mL M-CSF孵育6天,随后加入20 ng/mL IL-4孵育1天. 注意形态学与先前的发现一致(Young等人, J Immunol, 1990); the M1 population have fried egg morphology, 而M2有煎蛋状和纺锤形细胞的混合种群.

跟踪分化. 相图显示分化的人ips -derived单核细胞(第0-7天)的形态,它产生最终分化的人ips -derived巨噬细胞,包含大泡. 在维持介质中加入100 ng/mL M-CSF至少7天,实现分化.
 

观察形态学和细胞表面标记物,以研究分化. THP-1单核细胞暴露于培养基(未分化), 维生素D3或PMA® Fabfluor-488抗体与CD11b、CD14或CD40复合物. 与培养基单独或维生素D3处理的细胞相比,PMA显示细胞形态(hd -相位对比图像)有显著变化. 动力学图突出了不同处理下不同的和时间依赖的表面蛋白表达.

量化趋化作用

单核细胞成熟的生物学意义. THP-1 cells, 将naïve或PMA分化的M0接种在纤维连接蛋白包裹的ClearView趋化膜上. 然后将细胞暴露在C5a梯度下,使用Incucyte系统每小时获取一次图像. t=30小时进行药理学反应分析. 而分化的巨噬样THP-1细胞对C5a有较强的浓度依赖性反应, 在THP-1细胞分化前观察到很少或没有反应.

巨噬细胞趋化性动力学监测的重要性. Primary blood monocytes were differentiated into M2-like phenotype; 50 ng/mL M-CSF for 6 days followed by 20 ng/mL IL-4 for a further day. 巨噬细胞被接种在涂有Matrigel的ClearView趋化膜上, 然后暴露在C5a梯度下,使用Incucyte系统每2小时获取一次图像. 底侧期分析,药理反应测定在4.5 and 11 hrs. 注意,由于在较高浓度下反应延迟,C5a的效力发生了明显的时间依赖性转移, 当使用中性粒细胞时,没有观察到这种特异性反应.

量化吞噬作用

量化的吞噬作用. ipsc来源的巨噬细胞(Axol Bioscience)吞噬孵化细胞® pHrodo® Green E. 杆菌Bioparticles® 与时间和细胞数量有关.  在100 ug/well pHrodo存在下,ipsc来源的巨噬细胞的相位对比和荧光混合图像® Green E. 杆菌Bioparticles® 说明生物制品的吸收® over time.  下面是相应的掩膜图像,突出显示了使用分割来完全量化吞噬动力学.  使用单一的pHrodo, ipsc来源的巨噬细胞吞噬的时间过程® Green E. 生物制品用量(100 ug/well)显示细胞数量依赖性.

抗cd47诱导CCRF细胞吞噬. 用浓度增加的抗cd47抗体(B6H12)处理标记的CCRF-CEM细胞.2) and added to human bone marrow-derived macrophages (BMDM; values shown are mean ± SEM, n=4).

巨噬细胞内吞噬细胞的成像和定量. J774内吞噬Jurkat细胞.A1巨噬细胞显示高荧光强度,与细胞吞噬量成正比. 快速成像和2分钟间隔可用于创建电影显示个别吞没事件.

量化Efferocytosis

分化决定吞噬能力. THP-1细胞,分化为M0, 将M1或M2巨噬细胞暴露于200 nM PMA中24小时, 200 nM PMA, 24小时+ 20 ng/mL IFNγ + 1µg/mL LPS, 或200 nM PMA 24小时+ 20 ng/mL IL-4, 分别. 然后将细胞与pHrodo红标记的凋亡Jurkats共培养,通过吞噬Jurkats的荧光信号来评估分化的巨噬细胞的吞噬能力. 数据显示,M0和M2分化的THP-1细胞均具有明显较高的吞噬能力, 这与M2巨噬细胞的抗炎功能相一致.

References

巨噬细胞和癌症

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监管的吞噬作用

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巨噬细胞与传染病

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Chemotaxis

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